Методи вилучення ембріонів

Для штучного осіменіння корів-донорів використовують тільки сперму від видатних бугаїв-плідників, оцінених за якістю нащадків, дочки яких на 1,5...2,0% перевищують за продуктивністю середню в популяції. Запліднювальна здатність сперми таких бугаїв має бути не менше 70% за високою точністю її оцінки. Осіменяють корів-донорів подвійною порцією сперми.

День, коли корову-донора штучно осіменяли, − це дата запліднення. У біотехнології його називають день-нуль і від нього починають підрахунок розвитку ембріона іп vivo до його вимивання. Є три способи вилучення ембріонів - після забою корови-донора, хірургічним і нехірургічним шляхом.

Перший спосіб полягає у одержанні яйцеклітин, зигот або зародків із яйцепроводів або рогів матки після забою тварини. Найчастіше цей спосіб застосовується для отримання дозрілих яйцеклітин або зародків на стадії зиготи. Важливим у цьому випадку є точне визначення віку зародка або часу овуляції. Наприклад, у корів через три доби зародки переходять із яйцепроводів у роги матки. Вилучення зародків здійснюють шляхом промивання яйцепроводів або рогів матки поживним середовищем, наприклад, фосфатно-сольовим розчином Дюльбекко, що містить 2% сироватки крові великої рогатої худоби і антибіотики.

Другий спосіб − хірургічне вилучення ембріонів. Найпоширенішими методами є такі:

1. лапаротомія по білій лінії черева з використанням загальної анестезії;

2. лапаротомія у області голодної ямки з використанням місцевоїанестезії.

Суть першого методу полягає в тому, що корів і телицьпопередньо витримують 36...48 годин на голодній дієті. Часткове знерухомлення тварин здійснюють введенням внутрішньом'язово 2 мл Рампуну, потім тварину фіксують і здійснюють загальний наркоз внутрішньовенним уведенням 10-процентногорозчину

Хлоралгидрату з розрахунку 100 мл на 100 кг живої маси. Операційне місце обмивають, видаляють шерсть, шкіру дезінфікують 70-процентним етанолом і потім 10-процентною настоянкою йоду. По білій лінії, безпосередньо біля верхнього краю тазу, роблять надріз завдовжки 15 см, через нього обережно витягують роги матки і яєчники з яйцепроводами, оглядають і підраховують кількість жовтих тілець у яєчниках. У одному з рогів матки роблять прокол у місці біфуркації, через який вставляють катетер. Частіше застосовують матково-трубне вимивання, за якого в ампулярну частину яйцепроводу вставляють тонку голку з еластичним шлангом і шприцом нагнітають рідину, промиваючи таким чином ріг матки у напрямі біфуркації. Ефективність вимивання ембріонів такимметодом досягає 87%.

При лапаротомії шляхом розрізу черевної стінки в області голодної ямки справа або зліва операцію виконують на тварині, що стоїть. Роблять скальпелем вертикальний розріз шкіри завдовжки близько 15 см спереду колінного суглоба з подальшим розтином решти тканин черевної стінки. Підраховують число овуляцій за наявності жовтих тілець яєчника, підтягають ріг матки, роблять прокол стінки рогу матки і проводять вимивання так само, як і через вентральний розріз черевної стінки. Цим способом вдається вилучати більше 60% ембріонів від загальної кількості. Проте, промивання рогу матки, віддаленого від розрізу в області голодної ямки, утруднене через незручність його підтягування і фіксування в просвіті розрізу. У телиць такий метод вимивання ембріонів малопридатний через невеликі розміри рогів матки. У овець і свиней ембріони вимивають лише методом лапаротомії.

Слід зазначити, що хірургічний спосіб вилучення ембріонів є трудомістким і дорогим, особливо у великої рогатої худоби і його не можна використовувати багато разів, адже це, може викликати запалення, зокрема, ендометрію матки, що призводить до безпліддя. В даний час хірургічний спосіб вилучення ембріонів застосовується в окремих випадках, в основному з науковою метою.

Нині для вимивання зародків великої рогатої худоби застосовують нехірургічний спосіб їх виймання. Перевагами цього методу є простота маніпуляцій, можливість повторних вимивань ембріонів, менша вартість робіт. Відтворна здатність донорів, як правило, не порушується. Нехірургічне вимивання проводять найчастіше на 7...8 день після осіменіння. Тварин фіксують, пряму кишку вивільняють від фекалій і оцінюють стан статевих органів. Підраховують кількість жовтих тілець у кожному яєчнику, а також визначають стан матки і розміри її рогів. Зовнішні статеві органи ретельно промивають водою з милом, осушують серветкою, дезинфікують Септонексом або 70-процентним розчином етанолу. Для розслаблення мускулатури прямої кишки і матки, запобігання дефекації і зняття напруги тварині вводять 5... 10 мл 2-процентного розчину новокаїну в корінь хвоста (у ямку між крижами і першим хвостовим хребцем) і перевіряють ефективність його дії шляхом підняття і опускання хвоста. Потім, особливо норовистим коровам, катетер у закритому чохлі під ректальним контролем підводять до шийки матки і, фіксуючи її рукою через стінку прямої кишки, обережно проводять через шийку в один із рогів матки (рис. 50).

Перш ніж увести катетер у шийку матки чохол знімають. У міру просування катетера в ріг матки металевий стилет поступово видаляють. Видаливши стилет, у гумову кульку шприцом нагнітають 10...20 мл повітря, залежно від діаметра рогу матки. Ця кулька фіксує наконечник катетера в просвіті рогу матки, не дозволяючи промивному середовищу витікати з рогу, минувши отвір наконечника і канал катетера. Як промивну рідину використовують розчин Дюльбекко з 1...2% фетальної сироватки теляти і антибіотики. Потім у вільний кінець одного із шлангів уставляють голку і сполучають з флаконом із середовищем, а другий шланг опускають у флакон без середовища. Подача в катетер промивної рідини здійснюється самотік після розміщення флакону із середовищем на висоту до 2 м. У процесі промивання проводяться маніпуляції з рогом матки − масаж і підняття верхівки рогу. Вільне надходження промивної рідини з флакона і її відтік регулюється затискачами. Суворо контролюють кількість уведеної і зібраної промивної рідини. На промивання одного рогу витрачають не менше 400 мл і не більше 500 мл середовища. Після закінчення промивання одного рогу видаляють повітря з гумової кульки. Це виконується за допомогою шприца, що вставляється у відповідний отвір. Повітря виходить з гумової кулькиу шприц під час витягування поршня. Потім катетер видаляють, а в інший ріг матки вводять інший стерильний катетер і процедуру повторюють.

Рис. 50. Схема промивання матки великої рогатої худоби:

1- флакон з фізіологічним середовищем, 2 - голки, З - повітряний фільтр; 4 - шприц, 5 - двопозиційний краник або клапанний пристрій, 6 - трубки, 7 - судина для збирання змиву, 8 - безманжетний катетер, введений у ріг матки, 9 - шийка матки, 10 - ріг матки, 11 - яєчник (стрілками показано напрямок руху рідини, А - місце стиснення рогу матки)

У цілому, оптимальним варіантом є введення головки жорсткого катетера якомога ближче до верхівки рогу, проте слід пам'ятати, що у міру просування катетера до верхівки рогу зростає вірогідність травмування ним слизової оболонки рогу, про що свідчить наявність крові в промивному середовищі. Пошкодження слизової оболонки не тільки зменшує вірогідність знаходження ембріонів, а й негативно впливає на життєздатність ембріонів і може викликати запальний процес у тварини.

У овець і свиней нехірургічне вилучення ембріонів неможливе через труднощі проходження катетера через шийку в роги матки. Однак, хірургічна операція для цих видів тварин відносно проста і нетривала. Доступ до репродуктивного тракту здійснюється лапаротомією по білій лінії черева. У свиней 1-, 2- і 4-клітинні ембріони вилучають із яйцепроводів протягом 40 годин після овуляції. При цьому скляну канюлю вставляють до істмуса через маленький отвір у верхівці рогу матки. Через канюлю вводять 20...30 мл промивної рідини і збирають її з ампулярного кінця яйцепроводу в чашку Петрі. Для вилучення ембріонів із матки промивають яйцепровід і верхівку рогу матки. Ріг матки віджимають і канюлю вставляють у ріг матки. Звичайно для вимивання використовують середовище Дюльбекко з лактатом натрію, піруватом натрію і альбуміном сироватки крові великої рогатої худоби. Ембріони свиней можна вилучати до 12-го дня після початку охоти. Ефективність вилучення ембріонів звичайно висока (до 95%). Можна робити 3...4 операції на одній тварині.

За вилучення ембріонів від овець в ампулярний кінець яйцепроводу вводять скляну або поліетиленову канюлю і промивають із рогу матки в яйцепровід. Незалежно від часу вимивання після охоти ефективність вилучення ембріонів становить до 80%.

Дата добавления: 2017-02-01; Просмотров: 104; Нарушение авторских прав?; Мы поможем в написании вашей работы!