Механизм и этапы окраски по Цилю-Нельсону

Механизм и этапы окраски по Граму

1. На фиксированный мазок нанести карболово-спиртовой раствор генцианового фиолетового. Через 1 минуту экспозиции перейти к п.2.

2. Нанести раствор Люголя на 1-2 мин (йод).

3. Обесцветить этиловым спиртом в течение 30-60 сек. до прекращения отхождения фиолетовых струек красителя.

4. Возможно дополнительно промыть мазок водой.

5. Докрасить водным раствором фуксина в течение 1-2 мин,

6. Промыть водой, высушить и микроскопировать.

Грамположительные бактерии окрашиваются в темно-фиолетовый цвет, грамотрицательные - в красный.

1. На фиксированный мазок нанести карболовый раствор фуксина и подогреть до появления паров в течение 3-5 мин.

2. Промыть мазок водой

3. Нанести 5% раствор серной кислоты на 1-2 мин для обесцвечивания.

4. Промыть мазок водой

5. Докрасить мазок водным раствором метиленового синего в течение 3-5 мин

6. Промыть водой, высушить и микроскопировать

Некислоустойчивые – обесцвечиваются и окрашиваются метиленовым синим в голубой цвет, а кислоустойчивые остаются окрашенными фуксином в красный.

Метод Бурри-Гинса используется для окраски капсульных бактерий и основан на том, что капсула не воспринимает красители. Капсулу выявляют негативным контрастированием фона по Бурри. Для этого черную тушь смешивают c культурой и высушивают. После этого проводят фиксацию в пламени горелки, окрашивают тела микробных клеток по Гинсу - водным фуксином в течение 1 минуты и промывают водой 5-10 секунд.

Окраска по Леффлеру. Способ метахроматического выявления волютиновых зерен у коринебактерий. Для окраски используют щелочной раствор метиленового синего, который наносят на 3 - 5 мин на фиксированный мазок, после чего смывают водой, мазок высушивают и микроскопируют. Протоплазма бактерий окрашивается в голубой цвет, волютиновые зерна - в темно-синий.

Окраска по Нейссеру. Метод выявления волютиновых зерен у коринебактерий. Фиксированный мазок 2 - 3 мин красят уксуснокислым синим, 10 - 30 секунд обрабатывают раствором Люголя, слегка промывают водой и докрашивают в течение 30 секунд раствором везувина, высушивают и микроскопируют. Бактерии окрашиваются в желтый цвет, волютин -в темно-синий.

Окраска риккетсий по Здродовскому. Тонкий мазок фиксируют на пламени горелки. Окраску производят разведенным карболовым фуксином в течение 5 минут. Окрашенный препарат промывают водой, а затем обесцвечивают в растворе 0,01% соляной кислоты в течение 2—3 секунд. Затем препарат промывают водой и докрашивают 0,5% раствором метиленовой сини в течение полминуты. В препарате на синем фоне будут видны окрашенные в красный цвет риккетсии.

Окраска по Романовскому—Гимзе. Краска Гимзы — смесь азура (органическая краска, получаемая из метиленового синего), эозина и метиленовой сини. Будучи в растворе синего цвета, она окрашивает клеточную цитоплазму в голубой цвет, а ядра клеток, зернистость, слизь, капсулы бактерий — в красно-фиолетовый цвет.

Окраска по Романовскому—Гимзе является одним из основных методов при изучении морфологии простейших, спирохет, а также при исследовании форменных элементов крови.

Способ применения. К 10 мл дистиллированной воды перед окрашиванием препарата прибавляют 10 капель краски Гимзы и тотчас же наливают на фиксированный препарат (или погружают препарат в стаканчик с краской). Через 1 час краску сливают, препарат промывают водой, высушивают на воздухе и исследуют.

Задание 2. Устно ответим на вопросы, воспользовавшись учебником и лекционным материалом.

1. Почему возникает необходимость рассматривать окрашенные препараты? Каковы преимущества изучения фиксированных окрашенных мазков?

2. Из каких основных частей состоит световой микроскоп?

3. Какое увеличение оптимально для изучения бактерий и наиболее часто используется в бак.лабораториях?

4. Назначение иммерсионного объектива.

5. Методы приготовления нативных препаратов микроорганизмов.

6. Чем сложные методы окрашивания отличаются от простых?

7. Как выявляют капсулу микроорганизмов?

8. Как выявляют подвижность микроорганизмов?

9. Изложите алгоритм окрашивания фиксированного препарата по Граму.

Дата добавления: 2017-02-01; Просмотров: 79; Нарушение авторских прав?; Мы поможем в написании вашей работы!